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    本發明係提供以具有特定的Non-dipper型血壓一日內變動模式的人，尤其顯示SBP及DBP為正常值的健康人為對象，可有效地降低夜晚至清晨的收縮壓，可減輕早上容易發病，血壓一日內變動風險所導致的疾病發病降低之Non-dipper型血壓一日內變動的疾病發病風險用劑。本發明之降低用劑係以含有水解獸乳蛋白質而得之包含VPP及IPP之水解物或其濃縮物為特徵。
    公开号:TW201304800A
    申请号:TW100134794
    申请日:2011-09-27
    公开日:2013-02-01
    发明作者:Mari Takahashi；Naoyuki Yamamoto；Kazuhisa Yamada；Toshiro Iketani
    申请人:Calpis Co Ltd；
    IPC主号:A61K38-00
    专利说明:
    降低Non-dipper型血壓一日內變動的疾病發病風險用劑
    本發明係關於以夜晚至清晨的血壓降低率低，一般稱為Non-dipper型的人，尤其是24小時的平均血壓正常之血壓健康者為對象，可減輕早上容易發病，因血壓一日內變動之心血管或腦血管等之血管問題而發生的各種疾病發病風險之用劑。
    自以往已知高血壓症係腦梗塞、心肌梗塞、心肌缺血、粥狀動脈硬化、心臟衰竭、腦中風、冠狀動脈疾病、末梢血管疾病等許多疾病之重要風險要因。
    因此，發現許多具有降低血壓作用之成份，使用對象為高血壓患者。已知例如於Val Pro Pro或Ile Pro Pro等之三肽、含此等之酪蛋白水解物係具有血管收縮素I轉化酶抑制活性(ACEI活性)作用，顯示降低血壓作用(參考專利文獻1及2)。
    如此的高血壓患者的定義未必明確，雖因測定裝置或環境等而異，但近年來藉由逐漸普及的攜帶型24小時自動血壓計測定，一般多以收縮壓(SBP)的平均為130mmHg以上，舒張壓(DBP)的平均為80mmHg以上的人為對象(參考非專利文獻1)。
    因前述攜帶型24小時自動血壓計普及，近年，依據ABPM(ambulatory blood pressure monitoring)法，測定血壓一日內變動模式，對於各種疾病進行風險要因的分類探討(參考非專利文獻2)。
    人的血壓一日內變動，一般有白天高，夜晚至清晨變低之趨勢。已知於如此的血壓變動模式中，將夜晚的平均收縮壓相對於白天的平均收縮壓之降低率低於10%以上的人分類為Dipper型，降低未達10%的人分類為Non-dipper型之方法(非專利文獻3)，但現今狀況並無對此Dipper型、Non-dipper型之明確分類基準的規定。報告指出不論是何種，血壓一日內變動係Non-dipper型的人比Dipper型的人有容易於早上腦梗塞、心肌梗塞、心肌缺血、粥狀動脈硬化、心臟衰竭、腦中風、冠狀動脈疾病、末梢血管疾病等發病之趨勢。
    可知如此趨勢不僅見於高血壓症患者群，亦見於24小時之平均血壓正常之健康者群。
    一般，高血壓患者所投予的降血壓劑，已知具有降低白天血壓的作用者，或效果持續性長之降低一日內整體血壓等之各種種類。但是，關於以往無須攝取降血壓劑之前述正常血壓健康者，對於顯示使分類為Non-dipper型的人之夜晚至清晨之平均收縮壓接近於Dipper型的作用之用劑並不了解。 [先前技術文獻] [專利文獻]
    [專利文獻1]特開平6-40994號公報
    [專利文獻2]特開平3-120225號公報 [非專利文獻]
    [非專利文獻1]「高血壓治療指引2009」(第2章血壓測定與臨床評估，p8-17，(2009)日本高血壓學會發行)
    [非專利文獻2]Japanese Circulation Journal Vol. 64,Suppl. V,2000(24小時血壓計之使用(ABPM)基準相關指引，p1207-1237)
    [非專利文獻3]THE JOURNAL OF CLINICAL HYPERTENSION(The Impact of Lactotripeptides on Blood Pressure in Stage 1 and Stage 2 Hypertensives,p1-7)
    本發明之課題係以夜晚至清晨之血壓降低率低，被稱為特定的Non-dipper的人，尤其24小時之平均血壓正常之血壓健康者為對象，提供減輕早上容易發病，血壓一日內變動的疾病發病風險的用劑。
    依據本發明，藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上臂血壓，使0：00～5：00之平均收縮壓相對於8：00～21：00之平均收縮壓之降低率未達10%之Non-dipper型的人，尤其藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上臂血壓之收縮壓(SBP)的平均未達130mmHg，舒張壓(DBP)平均未達80mmHg的人，使經口攝取之降低血壓一日內變動的疾病發病風險用劑。
    提供含有水解獸乳蛋白質而得之包含Ile Pro Pro(IPP)及Val Pro Pro(VPP)之水解物或其濃縮物之降低Non-dipper型血壓一日內變動的疾病發病風險用劑(以下有時簡稱為本發明之降低劑)。
    本發明之降低劑係以具有特定的Non-dipper型血壓一日內變動模式的人，尤其顯示SBP及DBP為正常值之健康人為對象，可有效地降低夜晚至清晨之收縮壓，可期待降低容易於早上發病，血壓一日內變動所導致的疾病，例如腦梗塞、心肌梗塞、心肌缺血、粥狀動脈硬化、心臟衰竭、腦中風、冠狀動脈疾病、末梢血管疾病等許多疾病發病的風險。用以實施發明之最佳型態
    以下係更詳細地說明本發明。
    本發明之降低用劑係以藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上手臂血壓，以0：00～5：00之平均收縮壓相對於8：00～21：00之平均收縮壓之降低率未達10%之Non-dipper型的人，尤其藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上手臂血壓，SBP平均未達130mmHg，DBP平均未達80mmHg的人為對象。尤其後者的人即使為Non-dipper型，通常不被認為是高血壓症患者，為無須投予降血壓劑的人。然而，最近逐漸了解如此之夜晚或清晨血壓降低率低之Non-dipper型群之血壓一日內變動的疾病發病的風險係比Dipper型的人群高。本發明係可降低如此風險高的人之夜晚或清晨的血壓降低率，降低其風險。
    本發明之降低用劑係水解獸乳蛋白質而得之含有IPP及VPP之水解物或其濃縮物。
    作為獸乳蛋白質，可舉例如牛奶、馬奶、羊奶、山羊奶、此等加工乳之脫脂奶、還原乳、奶粉、煉乳，以牛奶或其加工乳尤佳。已知此等中所含蛋白質係含有IPP序列及VPP序列。
    獸乳的固形物濃度雖無特別限制，但例如使用脫脂乳時之無脂乳固形物濃度通常為3～15質量%程度，生產性上則以6～15重量%為宜。
    本發明之降低用劑所使用的水解物係水解獸乳蛋白質以得到IPP及VPP，VPP含量係以3μg/ml以上為宜，以30μg/ml～60μg/ml尤佳，以30μg/ml～40μg/ml更好，以及IPP含量係以2μg/ml以上為宜，以20μg/ml～40μg/ml尤佳，以20μg/ml～30μg/ml更好。
    作為前述水解方法，可舉例如藉由乳酸菌使含獸乳蛋白質之原料醱酵而得到醱酵物之方法(A)、藉由酵素將含獸乳蛋白質之原料，進行酵素分解之方法(B)、及組合前述(A)及(B)而得水解物之方法。
    前述方法(A)中，作為乳酸菌，可舉例屬於Streptococcus屬、Lactococcus屬、Lactbacillus屬、Bifidobacteria屬等之乳酸菌，但以Lactbacillus屬為宜。具體上，可舉例如Lactobacillus bulgaricus、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus casei、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus fermentum，尤其適合使用IPP及VPP之生產效率佳之Lactobacillus helveticus。
    更具體可舉例Lactobacillus helveticus ATCC 15009、Lactobacillus helveticus ATCC 521、Lactobacillus helveticus CM4株(獨立行政法人產業技術總合研究所專利生物寄託中心日本茨城縣筑波市東1-1-1中央第6寄存號碼：FERM BP-6060，寄存日1997. 8. 15)(以下稱為CM4株)。此CM4株係以前述寄存號碼註冊於國際承認用於專利程序上微生物寄存之布達佩斯條約。此菌株已申請專利。並且，此CM4株亦已經以寄存號碼CCRC910111寄存於中華民國。
    前述乳酸菌係以使用預先進行前培養之活性非常高之菌酛(starter)為宜。起始菌數係以105～109個/ml程度為宜。
    為使所得之醱酵物風味良好，使嗜好性良好，前述醱酵時可併用酵母。酵母的菌種雖無特別限定，但可舉例如適合之Saccharomyces cerevisiae等之Saccharomyces屬酵母。含酵母比率係可因應該目的而適當選擇。
    醱酵方法係可藉由以培養基培養1種或2種以上之前述乳酸菌，或以培養基培養混合1種或2種以上之前述乳酸菌以及1種或2種以上之前述酵母進行。
    作為培養基，可使用含前述獸乳蛋白質之原料培養基、或於此等中適當添加副成份之酵母萃取物、抗壞血酸等之維生素類、半胱胺酸等之胺基酸、氯化鈉等之鹽類、葡萄糖、蔗糖、棉子糖(raffinose)、水蘇糖(stachyose)等之糖類、明膠等之安定劑、香料等之培養基。
    醱酵係以得到前述IPP及VPP，例如可藉由通常的靜置或攪拌培養，醱酵溫度為25～50℃，以30～45℃為宜，醱酵時間為6～30小時，以10～24小時為宜。可藉由醱酵開始以pH6.0～7.0之條件等進行，當菌數為107個/ml以上，pH5.0以下的時間點停止培養之方法進行。另外，醱酵前的獸乳蛋白質亦可予以高溫加熱殺菌等。
    作為前述方法(B)使用的酵素，可舉例如以含有可切斷獸乳蛋白質中之Xaa Pro Xaa序列或Xaa Pro Pro Xaa序列(Xaa係表示任意胺基酸)之羧基末端之Pro Xaa序列之胜肽酶之酵素為宜。
    前述酵素係含有於活性中心具有絲胺酸之絲胺酸型之蛋白酶或於活性中心具有金屬之金屬蛋白酶為宜。作為金屬蛋白酶，可舉例如中性蛋白酶I、中性蛋白酶Ⅱ及白胺酸胺基胜肽酶等，就效率佳且短時間，進而以一個階段反應可得到所需水解物，以再含有此等中至少1種為宜。另外，作為前述可切斷Pro Xaa序列之胜肽酶係以等電點顯示酸性區域的酵素為宜。
    作為前述酵素，可舉例如Aspergillus oryzae等之麴菌來源之酵素群。如此酵素群係可舉例如以適當的培養基培養菌體、以水萃取所生產的酵素之酵素群等，尤其可舉例如Aspergillus oryzae來源的酵素群中等電點顯示酸性區域之酵素群為宜。
    作為前述Aspergillus oryzae來源之酵素群，可利用市售品，可舉例如Sumizyme EP、LP或MP(以上註冊商標，新日本化學(股)製)、UMAMIZYME(註冊商標，Amano Enzyme(股)製)、Sternzyme B11024、PROHIDROXY AMPL(以上，商品名，樋口商會股份有限公司製)、orientase ONS(註冊商標，阪急bioindustry(股)製)、Denatyme AP(註冊商標，NAGASE生化學社製)等，以使用Sumizyme EP(註冊商標，新日本化學(股)製)尤佳。
    使用此等市售的酵素群時，通常設定最適合條件，但為得到前述水解物，例如可因應使用的酵素群，適當地改變使用酵素量或反應時間等進行。
    前述酵素之添加量係例如於溶解獸乳蛋白質之水溶液，使酵素/獸乳蛋白質的量係質量比成為1/1000以上，以1/1000～1/10為宜，以1/100～1/10尤佳，以1/40～1/10更好的比率。
    反應條件係可因應酵素而適當選擇以得到目的水解物，但溫度通常為25～60℃，以45～55℃為宜，pH通常為3～10，以5～9為宜，以5～8尤佳。另外，酵素反應時間，通常為2～48小時，以7～15小時為宜。
    前述酵素反應結束係可藉由使酵素失去活性而進行，通常可以60～110℃使酵素失去活性，使反應停止。
    藉由前述方法(A)、(B)、及組合(A)與(B)之方法所得之水解物，因應需要，可藉由離心分離去除或各種過濾器處理以去除沈澱物。
    另外，因應需要，亦可自所得水解物去除具有苦味或臭味的胜肽。去除如此苦味成份或臭味成份係可使用活性碳或疏水性樹脂等進行。例如可藉由添加活性碳於相對於使用獸乳蛋白質量所得1～20質量%水解物中，使反應1～10小時而進行。去除使用的活性碳係可藉由離心分離或膜處理操作等已知方法進行。
    前述所得之水解物係可直接作為本發明之降低用劑利用。另外，為提高前述水解物之泛用性，亦可為濃縮後，乾燥粉末的形態。
    為改善營養均衡或風味等，於如此粉末中，亦可使含有各種輔助添加劑。可舉例如各種碳水化合物、脂質、維生素類、礦物質類、甘味料、香料、色素、質感改善劑等。
    本發明之降低用劑之投予量係對象的人每日以固形物換算前述水解物，通常為1mg～30g，以20mg～20g程度尤佳，亦可1日分數次攝取。
    投予期間係通常1天以上，以20天以上連續或持續地斷斷續續地攝取為宜。投予方法係以經口攝取進行。
    本發明之降低用劑之形態，可舉例如錠劑、丸劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微膠囊劑、散劑、顆粒劑、液劑等。
    前述製劑化係例如因應適當需要，使用藥劑所容許的載體、佐劑(adjuvant)、賦形劑、賦形劑、防腐劑、安定化劑、結合劑、pH調節劑、緩衝劑、增黏劑、膠化劑、保存劑、抗氧化劑等，可以一般認可之製劑實施所要求的單位用量形態製造。
    關於本發明之降低用劑之上述製劑化，期待提升本發明之功效等，亦可組合已知的降血壓劑使用。另外，與olmesartan或arotinolol等之已知顯示Non-dipper正常化作用之其他藥劑組合使用，期待增強本發明之功效。
    本發明之降低用劑，除了前述水解物，因應需要，亦可添加飲食品使用的成份，例如醣類、蛋白質、脂質、安定化劑、維生素、礦物質、香料、或此等之混合物等。實施例
    以下係藉由實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不受此等限制。 實施例1 ＜調製CM4醱酵乳＞
    以蒸餾水溶解市售脫脂奶粉，使固形率成為9%(w/w)，以高壓殺菌釜105℃，10分間高溫加熱殺菌後，冷卻至室溫，接種3%(v/w)之CM4株菌酛醱酵液(菌數5×108個/ml)，使於37℃，靜置狀態，醱酵24小時，得到CM4醱酵乳。 ＜測定CM4醱酵乳中之IPP及VPP量＞
    首先，將1ml之CM4醱酵乳直接以15000rpm離心分離10分鐘，回收其上清液(乳清)。使0.3ml之此乳清吸附於Sep-Pak Cartridge(Waters社製)，以蒸餾水洗淨。以5ml甲醇溶出，於離心處理下，使減壓、乾燥。以0.3ml之0.05%三氟乙酸水溶液溶解乾燥物，以下述條件進行HPLC分析。
    使用機種：日立L4000UV偵測器(以215nm偵測)，L6200 Intelligent Pump，L5030 column oven(35℃)，分離條件：流速0.5ml/分，沖提液：0.3M NaCl，0.05%三氟乙酸水溶液，管柱：商品名Asahipak GS320(Φ3.9×600mm)。
    該結果係CM4醱酵乳乳清中之VPP量為38.5μg/ml，IPP量為23.5μg/ml。 ＜調製試驗者用醱酵乳製品＞
    將加入安定化劑、甘味料、香料、水於所得之CM4醱酵乳後經均質化處理者，各填充160ml於玻璃瓶，溫度到達85℃，進行殺菌，作為試驗者用醱酵乳製品。試驗者用醱酵乳製品之成份分析結果如表1所示。該1日份之試驗者用醱酵乳製品中之VPP量為2.53mg及IPP量為1.52mg。
    另外，表中之麥芽糖醇係包含於糖質，鉀、鈣、磷及鈉係包含於灰份，VPP、IPP係包含於蛋白質之成份。 ＜選擇正常血壓之Dipper型及Non-dipper型試驗者＞
    對於現在未服用降高血壓藥，無重症之高血壓症、過敏性氣喘、重症之肝臟或腎臟疾病、腦中風、及心肌梗塞之經驗之55歲～71歲的試驗者12人，進行以下之血壓測定。
    要求各試驗者於非慣用手的手腕上安裝攜帶型24小時自動血壓計(型式ES-H531，Terumo社製)，每隔30分鐘，測定24小時之SBP、DBP及心跳數。
    其結果係選擇24小時之平均SBP未達130mmHg，24小時之平均DBP為80mmHg以下，而且心跳數無異常之試驗者6人。
    另外，由被選出6人試驗者之血壓測定結果，算出0：00～5：00之平均SBP相對於8：00～21：00之平均SBP之降低率，降低率為10%以上之試驗者分類為Dipper型，未達10%之試驗者分類為Non-dipper型。
    該結果係正常血壓之Dipper型試驗者3人(試驗者4、6、10)，正常血壓之Non-dipper型試驗者3人(試驗者3、8、9)。被選出的各試驗者之前述數據中，Dipper型試驗者之SBP數據如表2所示，DBP數據如表3所示，Non-dipper型試驗者之SBP數據如表4所示，DBP數據如表5所示。另外，測定中試驗者之心跳數未見有變化。

    ＜測定降低血壓一日內變動的疾病發病風險的作用＞
    四週內不改變前述所選擇之正常血壓之Dipper型及Non-dipper型試驗者的生活習慣，不服用降血壓藥後，要求起床後每天早上攝取160ml之前述試驗者用醱酵乳製品1個月。
    最終攝取日的隔天，要求各試驗者於非慣用手的手腕上安裝攜帶型24小時自動血壓計(型式ES-H531，Terumo社製)，於自由行動下，自早上8:00，每隔30分鐘，測定SBP、DBP及心跳數24小時。
    此等結果中，以0：00-7：00作為夜晚至早上疾病發病風險之血壓一日內變動時間帶，比較攝取試驗者用醱酵乳製品前之前述SBP值。結果分別表示，Dipper型試驗者的結果如圖1，Non-dipper型試驗者的結果如圖2。
    由圖1及圖2的結果，認為於0：00-7：00之SBP，前述攝取試驗者用醱酵乳製品前後之Dipper群無有意義差，但認為Non-dipper群具有有意義差(P＜0.05，paired t-test)。因此，關於本發明之含有獸乳蛋白質水解物之前述試驗者用醱酵乳製品係以本發明規定之顯示SBP及DBP為正常值之健康人，具有特定的Non-dipper型血壓一日內變動的人為對象，可有效地降低夜晚至清晨的收縮壓，明白可減輕早上容易發病，血壓一日內變動的疾病發病風險。另外，測定中試驗者的心跳數未見有變化。
    [圖1]　用以比較實施例1進行之降低Dipper型之血壓一日內變動的疾病發病風險的作用之測定前後之SBP圖。
    [圖2]　用以比較實施例1進行之降低Non-Dipper型之血壓一日內變動的疾病發病風險之作用之測定前後之SBP圖。
    权利要求:
    Claims (8)
    [1] 一種降低Non-dipper型血壓一日內變動的疾病發病風險用劑，其係藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上手臂血壓，使0：00～5：00之平均收縮壓相對於8：00～21：00之平均收縮壓之降低率未達10%之Non-dipper型的人經口攝取之降低血壓一日內變動的疾病發病風險用劑，其特徵係含有水解獸乳蛋白質而得之包含Ile Pro Pro及Val Pro Pro之水解物或其濃縮物。
    [2] 如申請專利範圍第1項之降低用劑，其中前述Non-dipper型的人係藉由攜帶型24小時自動血壓計，每隔30分鐘測定上手臂血壓，收縮壓(SBP)平均未達130mmHg，舒張壓(DBP)平均未達80mmHg。
    [3] 如申請專利範圍第1項或第2項之降低用劑，其中前述水解物係以使成為Val Pro Pro之含量為3μg/ml以上，及Ile Pro Pro之含量為2μg/ml以上之條件而被水解之水解物。
    [4] 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之降低用劑，其中前述水解物係將含獸乳蛋白質之原料，藉由乳酸菌醱酵之醱酵物。
    [5] 如申請專利範圍第4項之降低用劑，其中乳酸菌係包含Lactobacillus helveticus。
    [6] 如申請專利範圍第5項之降低用劑，其中Lactobacillus helveticus係寄存號碼：FERM BP-6060之Lactobacillus helveticus。
    [7] 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之降低用劑，其中前述水解物係將含獸乳蛋白質之原料，藉由來自麴菌的酵素進行酵素分解而得之分解物。
    [8] 如申請專利範圍第7項之降低用劑，其中來自麴菌的酵素係來自Aspergillus oryzae的酵素。
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